L'Annunciazione di Guido Reni (olio su tela; cm 266,5 x 168) costituisce uno dei capolavori più significativi della collezione della Pinacoteca Civica, testimonianza di eccezionale bellezza dell'opera del maestro bolognese, realizzata per la chiesa barocca di S. Pietro in Valle di Fano. Il dipinto, commissionato da Padre Girolamo Gabrielli per l'ultima cappella della chiesa sul lato sinistro, è un dipinto interessante, eccezionalmente documentato grazie ad epistole dello stesso artista e altre testimonianze che fanno luce sulla sua commissione, sulle fasi della realizzazione ed altri aspetti relativi alle scelte pittoriche e figurative. L'autore ultimò e inviò la tela a Fano alla fine del 1621. Per il soggetto s'ispirò al precedente dipinto eseguito dieci anni prima per la cappella Gabrielli del Quirinale a Roma. Nel dipinto romano la Vergine risponde ancora al dettato controriformistico e non osa alzare lo sguardo. Al contrario nella tela fanese fissa negli occhi l'angelo annunciante con un'espressione più interrogativa che spaventata.